style="width:4.52664in;height:0.95986in" /> (1) 本文是学习GB-T 32226-2015 果糖二磷酸钠 FDP 含量测定用固体复合酶 ALD、TIM、GDH 试剂. 而整理的学习笔记,分享出来希望更多人受益,如果存在侵权请及时联系我们
本标准规定了果糖二磷酸钠(FDP) 含量测定用固体复合酶(ALD、TIM、GDH)
验方法、检验规则、标志、包装和贮存。
本标准适用于果糖二磷酸钠(FDP) 含量测定用固体复合酶(ALD、TIM、GDH)
试剂的技术要求、试
试剂。
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 9721 化学试剂 分子吸收分光光度法通则(紫外和可见光部分)
GB 15346 化学试剂 包装及标志
GB 19489 实验室 生物安全通用要求
HG/T 3921 化学试剂 采样及验收规则
JJF 1070 定量包装商品净含量计量检验规则
下列术语和定义适用于本文件。
3.1.1
固体复合酶 solid enzyme
果糖二磷酸钠含量测定用的复合酶试剂，含醛缩酶(ALD)、
磷酸丙糖异构酶(TIM) 和甘油磷酸脱
氢酶(GDH) 的复合酶试剂。
3.1.2
固体复合酶活力 solid enzyme activity
室温下，1 mg 酶 在 1 min 内催化果糖二磷酸钠(FDP) 的质量(μg),用μg/(min
·mg) 表示。
下列缩略语适用于本文件。
ALD: 醛缩酶
ALD、TIM、GDH: 固体复合酶
DAN: 氧化型辅酶I
FDP: 果糖二磷酸钠
GDH: 甘油磷酸脱氢酶
NADH: 还原辅酶 I
GB/T 32226—2015
TIM: 磷酸丙糖异构酶
本固体复合酶由醛缩酶(ALD)、 磷酸丙糖异构酶(TIM)、 甘油磷酸脱氢酶(GDH)
组成。各组分的 重量份是：ALD (醛缩酶)20%～25%,TIM
(磷酸丙糖异构酶)30%～40%,GDH (甘油磷酸脱氢酶)
30%～35%。
本品为浅红色或类白色冻干粉，溶于三羟甲基氨基甲烷溶液(0.1 mol/L,pH
7.6)。
固体酶活力不小于40μg/(min ·mg)。
符合 GB 19489 的要求。
除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和 GB/T6682
中规定的三级(含三级)以上
的水。
肉眼观察为浅红色或类白色冻干粉。
本产品是以动物肌肉为主要原料生产的含 ALD、TIM 和 GDH 的复合酶试剂。
FDP 在 NADH 的
存在下，先后经 ALD、TIM 和 GDH 的作用， 一分子 FDP 能使两分子 NADH
氧化成 DAN, 引 起
NADH 反应前后在340 nm 处吸光度发生变化，在线性范围内，通过测定 NADH
在单位时间内产生的
吸光度变化值，可计算固体复合酶的活力。
5.2.2.1 盐酸三乙醇胺缓冲液(0.4 mol/L pH
7.6):取盐酸三乙醇胺18.6 g, 加水200 mL 溶解，加 3.7g
乙二胺四乙酸二钠，溶解后，用2 mol/L 氢氧化钠(约18 mL) 调节 pH
至7.60,加水稀释至
250 mL。 或取17.5 g 三乙醇胺，加水约200 mL, 加盐酸4 mL, 混匀，加3.7 g
乙二胺四乙酸二钠，溶解 后，用2 mol/L 氢氧化钠溶液或2 mol/L
盐酸溶液调节pH 至7.6,加水稀释至250 mL。 过滤后4℃保 存， 一周内使用。
5.2.2.2 复合酶溶液：取固体复合酶0.1 g
加盐酸三乙醇胺缓冲液(pH7.6) 溶解并稀释至10 mL 。重熔 漏斗过滤，4
℃下保存。
5.2.2.3 还原型辅酶I 溶液：取还原型辅酶I6.5
mg,加盐酸三乙醇胺缓冲液溶解，并稀释至50 mL。
GB/T 32226—2015
5.2.2.4 果糖二磷酸钠溶液：取果糖二磷酸钠0.3 g
(按无水物计算),用水溶解并稀释至10 mL。
紫外-可见分光光度法应符合 GB/T 9721 的规定。
取两只石英吸收皿， 一只加2.99 mL 还原型辅酶I 溶液和10 μL
果糖二磷酸钠溶液，作为样品池； 另一只加2.99 mL
盐酸三乙醇胺缓冲液和10μL 果糖二磷酸钠溶液，作为空白池，摇匀，静置5
min, 在
340nm 波长处测定吸光度。向样品池中加入40 μL 复合酶溶液，在20℃~
25℃立即摇匀并准确记
时，于1 min,2min,3min,4 min,5min
分别测定吸光度，以时间为横坐标，吸光度为纵坐标作图，取近
似直线部分的斜率(即平均每分钟吸收度的差值△A)。 重复测定2次，取平均值。
固体复合酶的活力按式(1)计算：
style="width:4.52664in;height:0.95986in" /> (1)
式中：
X 固体复合酶的活力，单位为微克每毫克(μg/mg);
△A — 平均每 min 吸收度的差值；
3 - 反应溶液体积，单位为毫升(mL);
406.06 — 果糖二磷酸钠三钠盐的相对分子质量(C₅H₁Na₃O₁₂P₂);
1000 — 毫克转化为微克，单位为微克(μg);
6.29×10³——还原型辅酶I(DPNH) 的摩尔吸收系数；
2 — 果糖二磷酸钠反应系数；
W — 加入样品池中的酶溶液质量，单位为毫克(mg)。
按 JJF 1070 执行。
按 HG/T 3921 的规定进行采样。
6.2.1 出厂检验项目包括外观、酶活力。
6.2.2
产品出厂前，应由生产厂的质检部门负责按本标准规定逐批进行检验。符合标准要求，并签署
质量合格证的产品方可出厂。
6.3.1 在出厂检验合格的成批产品中随机抽取 √n+1(n
表示产品数量),进行型式检验。
6.3.2
型式检验项目为全项检验，包括外观、酶活力。但有下列情况之一时，也应进行型式检验：
a) 产品正常生产时， 一季度进行一次；
b) 生产工艺、设备、原料有较大改变，可能影响产品质量时；
GB/T 32226—2015
c) 停产半年以上，重新恢复生产时；
d) 出厂检验结果与上次型式检验结果有较大差异时；
e) 国家监督机构提出型式检验要求时。
抽取样品经检验，所检项目全部合格，则判该批产品为合格品；如果在检验中结果有一项指标不符
合标准时，允许在同批产品中两倍量重新抽样，如复检结果仍有一项不合格者则判该批产品为不合
格品。
本产品的包装、标志按 GB15346 的规定执行。
内包装采用棕色或白色密封玻璃瓶。净含量为0.1g;0.2g;0.3g;0.5g;1g。
外包装采用密封塑料 盒。复合酶(ALD、TIM、GDH)
试剂包装瓶上应贴标签，并注明：型号、批号、生产日期、净含量、保质期、
厂名厂址、电话、邮编及使用方法。
运输时不得与有害物质混放、混运，不得重压，低温避光，控制温度在4℃以下。
贮存于-20℃。本产品自生产之日起，保质期为18个月。
GB/T 32226—2015
(资料性附录)
固体复合酶(ALD、TIM、GDH) 试剂含量测定使用说明
A.1 试 剂
A.1.1 空白酶溶液
取固体复合酶(活力应符合规定)60 mg, 用盐酸三乙醇胺缓冲液溶解并稀释至20
mL, 垂 熔 漏 斗 过
滤，4 ℃保存，两天内使用。
A.1.2 测定酶溶液
取 1 0mL 空白酶溶液，加3.0 mg 还原型辅酶 I(NADH),
溶解后4℃保存，两天内使用。
A.2 供试品溶液的制备
取复合酶适量，精确称定，加水溶解。制成每毫升(mL) 约含0.4 mg
(按无水物计算)的溶液。
A.3 测 定 方 法
精密量取盐酸三乙醇胺缓冲液2 mL, 测 定 酶 溶 液 1 mL,
置石英吸收池中；另精密量取上述缓冲液 2mL, 空 白 酶 溶 液 1 mL,
置另一吸收池，作为空白，摇匀，静置15 min, 在340 nm 波长处测定吸光度
A₁ 。 各池再分别加入供试品溶液0 . 1 mL, 摇匀，于20℃~25℃放置10 min, 在
3 4 0 nm 波长处测定，
直至吸光度基本不变，读取吸光度A₂ 。 求出吸光度差值(△A)(△A=A,-
1.0333Az) 。 果 糖 二 磷 酸 钠
含量按式(A. 1) 计 算 ：
style="width:5.71985in;height:0.62656in" /> … … … … … … … …(A. 1)
式 中 ：
X — 果糖二磷酸钠含量，%;
△A — 吸光度差值；
3.0 — — 加入供试品溶液前样品池中溶液的体积，单位为毫升(mL):
406.06 果糖二磷酸三钠盐的相对分子质量(C₆H₁Na₃O₁₂P₂);
n — 稀释倍数；
6 .29×10³ — — 还原型辅酶 I(NADH) 的摩尔吸收系数；
2 — — 果糖二磷酸钠反应系数；
0.1 — — 供试品溶液加入体积，单位为毫升(mL);
W 供试品的取样量(以无水物计算),单位为毫克(mg)。
A.4 测试范围
适用于 ：
a) 注射用果糖二磷酸钠；
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b) 果糖二磷酸钠注射液；
c) 果糖二磷酸钠片；
d) 果糖二磷酸钠胶囊；
e) 果糖二磷酸钠口服溶液；
f) 果糖二磷酸钠类产品。
A.5 注意事项
上述操作在室温20℃~25℃为宜。
更多内容 可以 GB-T 32226-2015 果糖二磷酸钠 FDP 含量测定用固体复合酶 ALD、TIM、GDH 试剂. 进一步学习